周鵑　印培民

摘要：報道了用HP20大孔吸附樹脂從發酵液中提取Mevastatin的研究結果。HP20大孔吸附樹脂每mL濕樹脂對Mevastatin的吸附能力為83.8 mg 。用本方法制取的Mevastatin 純度達95%(HPLC)，完全符合用于Pravastatin的生產。
關鍵詞：HP20大孔吸附樹脂；Mevastatin；吸附
中圖分類號：TQ460.6⁺4；R972⁺.6；TQ424.3　　　文獻標識碼：A1　材料和方法

1.1　吸附樹脂

ZHOU Juan¹， YIN Pei-min²
(1.Jiangxi Institute for Drug Control， Nanchang 330046， PRC;
2.Institute of Microbiology,Jiangxi Academy of Sciences， Nanchang 330029,PRC)

　　Abstract：This paper described the method of recovery of Mevastatin from fermentation liquid by macroreticula adsorbent HP20.The adsorption ability of HP20 is 83.8 mg Mevastatin/ml resin.The purity of Mevastatin produced by this method is detected as 95% with HPLC.This technic is highly suitable for using as the raw material for Pravastatin production.
　　Key words：Macroreticula adsorbent HP20；Mevastatin；Adsorption

　　羥甲基戊二酰輔酶A還原酶(HMG-GoA)抑制劑Pravastatin Na是**由高血脂引起的心血管**的*新一代**藥。Pravastatin Na的生產方法為微生物二步發酵法。先由青霉(Penicillium citrinum)從糖發酵生產Mevastatin(又名Compactin,ML-236B)。經提取精制得到的Mevastatin在NaOH作用下轉化為Mevastatin Na,再由Streptomyces carbophilus等具有羥基化酶活性的微生物發酵轉化為Pravastatin Na^［1，2］。
　　關于從發酵液中提取精制Mevastatin的方法，有報道：有機溶媒萃取結合各種層析技術^［3，4］，但未見其它論文公開報道。我們通過實驗選出了HP20大孔吸附樹脂，它具有非常優良的對Mevastatin的吸附性能，所構建的提取精制工藝簡單、高效，**工業應用價值。


　　HP20(Diaion)，使用前按常規處理。
1.2　Mevastatin發酵液
　　由Penicillium citrinum thom 38065發酵而得，Mevastatin的質量濃度在400 mg^．L^-1左右。
1.3　Mevastatin標準品
　　由日本靜岡大學生物工學研究室提供。純度為99%(HPLC)。
1.4　試劑
　　各種試劑均為化學純或HPLC級。
1.5　Mevastatin的分析方法
　　Mevastatin的濃度用高壓液相色譜法測定(島津LC-10AD型)。
　　流動相：甲醇77%、水22.8%、醋酸0.1%、三乙胺0.1%。
　　流　速：1.0 mL^．min^-1。
　　分析柱：STR ODS-II，4.6 mm×150 mm(日本信和化工株式會社)。
　　測定波長(λ)：237 nm。
　　測定溫度：25 ℃。
　　測定時間：10 min (Mevastatin的保留時間為(6.5±0.2) min)。
1.6　采用動態吸附法^［5］
　　樣品被吸附后，樹脂用無鹽水洗滌，φ=0%～100%丙酮梯度解吸。


　　Mevastatin溶液在HP20樹脂上的吸附曲線如圖1 (Fig.1)所示。V_吸附(濾液量)∶V(HP20樹脂)在150∶1以內時，吸附效果*好，無Mevastatin泄漏。當該體積比大于150∶1時，Mevastatin的泄漏急劇上升。至170∶1時，樹脂吸附基本完成，此后吸附量緩慢上升，至220∶1時，達吸附平衡狀態。該吸附曲線表明，HP20樹脂對Mevastatin有很強的吸附力，每1 mL濕樹脂對Mevastatin的吸附量為83.8 mg。Mevastatin發酵液在HP20樹脂上的吸附行為亦如圖所示，但總吸附量由于發酵液中各種雜質的影響而有所下降。此后用無鹽水洗滌吸附樹脂，以除去各種無機離子、部分色素等雜質。2　結果和討論

2.1　Mevastatin在HP20脂樹上的吸附和解吸

　　Mevastatin在HP20樹脂上的解吸曲線如圖2(Fig.2)所示。采用φ=0%～100%丙酮梯度洗脫。當丙酮在φ=0%～20%時，大量吸附在樹脂上的色素被洗脫而無Mevastatin被洗脫。進一步將丙酮從φ=20%升至φ=100%時，被吸附在樹脂上的Mevastatin在φ=(30%～60%)的丙酮中被集中洗脫下來。所收集的含Mevastatin的洗脫液為淡黃色，濃縮比達15倍以上。充分體現了梯度洗脫液體積小，時間短的特點。之后樹脂在高體積分數的丙酮下完成清洗，用水再生后即可重新使用。

2.2　實驗室提取實驗
　　用HP20樹脂從發酵液中提取精制Mevastatin的工藝如下：發酵液經過濾得濾液，濾液用2 mol^．L^-1 HCl調pH至7.0，進HP20樹脂柱吸附。當進樣量達到樹脂的工作吸附容量，即檢有Mevastatin漏出時，停止進樣。繼而用無鹽水洗滌HP20樹脂后，用φ=(0%～100%)丙酮梯度洗脫，收集含Mevastatin的解析液。用w=0.05%活性炭脫色后，蒸去丙酮，濃縮凍干得Mevastatin粗品。粗品用少量φ=35%的丙酮復溶后，加入3～5倍pH 2.0的蒸鎦水結晶得Mevastatin。各步收率和純度見表1(Tablel)。