銀杏葉黃酮醇甙的樹脂法純化(D101樹脂與層析用聚酰胺樹脂混合使用)
國內外的銀杏葉制劑有Tanakan, Tebonin, Forte,Ginkgogink,Craton, Duophan, 天保寧，百路達，銀可絡等。德國 Schwabe公司和法國Ipsen公司生產的銀杏葉制劑是有具體規格標準的銀杏葉提取物GBE761，其中黃酮醇甙（1）含量≥24%，銀杏內酯（2）≥6%，銀杏酸≤100ppm。國內制藥行業所用GBE的質量，一般（1）≥24%，（2）為2%--3%。GBE在食品飲料，化妝品等方面應用的質量基本要求為（1）≥20%，原花色素≤10%，烷基酚≤10ppm, （2）的指標因具體品種要求而定。
目前，國內多采用青葉為原料制備，工藝上采用溶劑法和樹脂法。前法是通過有機溶劑（乙醇，丙酮，甲醇等）浸泡葉子，過濾，水析，濃縮為銀杏浸膏，產率約12%---15%，（1）的含量3%--5%，再經液-液萃取（二氯甲烷，氯仿，乙醚，丁酮，乙酸乙酯等），產率約0.8%--1.0%, (1)的含量15%--18%。樹脂法采用大孔吸附樹脂，聚酰胺等對（1）進行吸附和解附，產率1.0%--3.0%, 含量10%--28%。
提取
取黃葉500g, 破碎至大小0.5--1.5cm, 加45%乙醇水溶液，葉重(g)與溶劑體積比(ml)為1:6--1:8, 回流2h。共提取兩次，合并提取液5.4L。回收乙醇，濃縮液用水稀釋至3L。取樣進行HPLC分析。固溶物提取率為20.9%, 黃酮醇甙含量為2.12%, 提取率為方便用戶94%。
絮凝反應
絮凝劑用量為40--50ml, 加入到3L提取液中，攪拌，產生大量絮狀沉淀。離心過濾，濾液為澄清透明液體，固溶物為15.6%，（1）含量 為2.57%.
PH沉降
用0.5mol/L NaOH溶液，調節上述澄清液PH至8.5---9.0, 產生絮狀沉淀。離心過濾，濾液用0.5mol/L HCl 溶液調PH至6--7。其固溶物為14.2%, 含量為2.54%。
樹脂吸附
取D101樹脂和聚酰胺樹脂約400g, 體積比為1:1, 體積為1000ml, 混勻裝柱。將經絮凝，PH處理的澄清液約3L, 上混合固定床。樹脂的吸附量約為3.0g/100ml。以3--4倍柱體積的水洗，然后以70%乙醇解吸，經濃縮，干燥得到產品6.4g, 相對葉重得率為1.28%, (1)含量為25.1%.
討論
1 提取劑的選擇
目前，有丙酮-水，乙醇-水和水等幾種溶劑作為提取劑。以丙酮提取時，葉綠素等含量高；水提取或低濃度乙醇提取時，水溶性雜質多，（1）提取率低；高濃度乙醇提取時，烷基酚，原花色素等醇溶性物質含量高。經優選，用45%乙醇水溶液提取，所得產品有害成份含量少，（1）的提取率在90%以上。
2 絮凝劑
絮凝劑為合成的高分子聚合物，能使蛋白質變性，產生沉淀。沉淀呈棉絮狀，因而使（1）等被包裹而引起損失。添加1%--2%的絮凝劑，能使溶液中的固溶物下降5%--6%, 黃酮損失率為9.48%。
3 PH值調節
溶液PH調至8.5--9.0時，主要沉降原花色素。原花色素與(1)的紫外吸收波長相近，因而比色法分析（1）含量偏高。HPLC法采用酸水解，C18柱展開，能避免原花色素的干擾。原花色素對人體有一定的毒性，因而必須在GBE產品中控制其含量。經PH酸堿處理，溶液中的固溶物下降約1.5%, (1)略有損失。
4 樹脂的選擇
D101和聚酰胺樹脂混合使用為國內**。D101等大孔吸附樹脂對黃酮吸附率為6--7mg/lg樹脂，對固溶物的吸附率為2.2--2.5g/100ml, 因而對（1）選擇性差，得率為2.5%---3.0%, (1)含量 10%--16%。相反，聚酰胺樹脂對（1）吸附的選擇性高，對（1）吸附率為15--20mg/lg樹脂。產品得率低，一般小于1%，但（1）含量高達24%--30%。針對兩種樹脂的特點選用一定體積比（1:1)的混合樹脂，不僅能改善選擇性，而且產品得率提高1.3%, 黃酮醇甙純度大于24%.
5 樹脂再生
樹脂再生的好壞直接影響其吸附能力。可選用0.4--0.6mol/L NaOH溶液和HCl溶液分別對混合樹脂進行酸堿處理，*后以水沖洗至中性。
